FBN
Votre dernière publication présente une nouvelle technique, de quoi s'agit il, et comment vous en est venue l'idée ?

Marlène Maitre, Jean Michel Revest
L'originalité de notre article est qu'il décrit – pour la première fois – une approche méthodologique qui permet d'analyser des cascades de signalisation via la détection de protéines phosphorylées à partir de tissus de cerveau isolés par microdissection laser. En effet, la complexité et l'hétérogénéité anatomo-fonctionnelle du système nerveux central ne reposent pas seulement sur des changements d'expression d'ARN, mais une très large partie des régulations se traduit au niveau post-traductionnel, notamment par des changements dynamiques entre des activités kinases et phosphatases. La balance kinases/phosphatases est capitale pour les adaptations neuronales. Différentes méthodes permettent de mesurer les activités kinases. Nous avons opté pour la technique du western blot qui est la plus communément utilisée. Le challenge était donc d'adapter cette technique qui nécessite une importante quantité de protéines à la microdissection laser qui permet d'isoler des sous-régions cérébrales avec une grande précision.

FBN
Vos travaux précédents ont-ils contribués à sa mise au point ?

MM, JMR
Nos compétences respectives ont largement contribué à la mise au point de cette approche méthodologique. Concernant la préparation des tissus, je me suis inspirée du travail déjà réalisé en microdissection laser sur les ARN qui comme les phosphoprotéines sont très sensibles. Concernant l'analyse du dosage des protéines et le traitement des échantillons par western blot, nous nous sommes inspirés du travail réalisé dans le groupe mais nous l'avons « miniaturisé » et adapté pour traiter des échantillons issus de la microdissection laser.


FBN
Cette technique est elle particulièrement dévolue aux recherches menées dans votre laboratoire ?

MM, JMR
Non absolument pas. Elle est dédiée à toutes les personnes qui travaillent sur des modifications post-traductionnelles et qui sont confrontées à des problèmes d'hétérogénéité de tissus ou à des structures tissulaires trop petites pour être manuellement disséquées. Cette approche offre de nombreux avantages comme la fiabilité, la reproductibilité et la sélectivité comparée aux dissections manuelles conventionnelles. De fait, cette technique est donc particulièrement bien adaptée aux recherches en Neurosciences. Mais d'autres domaines de recherche sont potentiellement intéressés comme par exemple la cancérologie où les protéines oncogéniques à activités kinases jouent un rôle prépondérant.

FBN
Sur quoi travaillez vous actuellement ?

MM, JMR
Actuellement, nous appliquons cette nouvelle méthode à un projet de recherche initié par le Professeur Umberto Spampinato. En parallèle, je travaille sur différents projets couplant la microdissection laser et la PCR en temps réel. Pour ces projets, je travaille en étroite collaboration avec la plateforme du transcriptome, l'une des 4 plateformes du Neurocentre Magendie.